Unterschied zwischen Nitrocellulose und PVDF | Nitrocellulose vs PVDF

Hauptunterschied - Nitrocellulose vs PVDF

Western Blot ist eine Methode, mit der spezifische Proteine ​​aus einer Proteinprobe nachgewiesen und quantifiziert werden können. Die Zuverlässigkeit der Technik hängt von der Auswahl einer richtigen Membran für die Absorption von Proteinen aus dem Gel ab. Es gibt verschiedene Arten von mikroporösen Membranen. Nitrozellulose- und PVDF-Membranen sind zwei solche Membranen, die von den Forschern aufgrund ihrer besonderen Eigenschaften gegenüber den anderen Arten von Membranen bevorzugt werden. Die Auswahl zwischen der Nitrocellulose oder PVDF ist auch eine weitere Herausforderung beim Western-Blotting. Sowohl Nitrocellulose als auch PVDF haben eine hohe Proteinabsorptionskapazität. Der Hauptunterschied zwischen Nitrozellulose und PVDF-Membran besteht darin, dass Nitrozellulosemembranen nicht die Fähigkeit haben, Antikörper abzutrennen und die Membran für die Antikörperwiederverwendung wiederzuverwenden, während PVDF-Membranen die Fähigkeit zur Entfernung und Wiederverwendung haben .

INHALT

1. Übersicht und Tastendifferenz

2. Was ist Nitrocellulose

3. Was ist PVDF

4. Seite an Seite Vergleich - Nitrocellulose vs PVDF

5. Zusammenfassung

Was ist Nitrocellulose?

Nitrocellulose ist ein Polymer, das durch die Behandlung von Cellulose mit Salpetersäure hergestellt wird. Es wird zur Herstellung von mikroporösen Membranen in der Molekularbiologie verwendet, insbesondere für Blotting-Techniken wie Southern-, Northern- und Western Blotting. Die Porengrößen der Nitrozellulosemembranen liegen im Bereich von 3 bis 20 μm. Mikroporöse Membranen aus Nitrocellulose erleichtern den Nachweis immunchemischer Reaktionen auf der Oberfläche der Membran. Deshalb werden Nitrozellulosemembranen häufig zur Immobilisierung von Proteinen und zum Nachweis spezifischer Proteine ​​beim Western-Blotting verwendet. Nitrozellulosemembranen können auch Glykoproteine ​​und Nukleinsäuren immobilisieren.

Nitrozellulosemembranen werden aufgrund ihrer Eigenschaften in Lateral Flow Assays bevorzugt. Nitrozellulosemembranen absorbieren Proteine ​​in hoher Konzentration. Das Lösungsmittel, mit dem die Membran benetzt wird, vermindert nicht die Absorption von Nitrocellulose-Membranproteinen. Nitrocellulosemembranen lassen sich leicht auf die gewünschte Gelgröße zuschneiden und Proteine ​​durch elektrische oder kapillare Übertragung vom Gel zur Membran übertragen. Nitrocellulose ermöglicht einen schnelleren Fluss von Proteinen durch die Membran mit hohem Bindungspotential. Nitrocellulose zeigt eine verbesserte Handhabungsstärke. Ein weiteres besonderes Merkmal der Nitrozellulosemembran ist, dass sie mit wasserfreien Klebstoffen ohne Lösungsmittel auf verschiedene Kunststoffträger aufgeklebt werden kann.

Abbildung 01: Nitrozellulosemembran für Western Blot

Was ist PVDF?

Polyvinylidendifluorid (PVDF) ist ein Fluorpolymer, das durch Polymerisation von Vinylidendifluorid hergestellt wird und eine hohe Fähigkeit zur Immobilisierung von Proteinen besitzt. Daher werden mikroporöse Membranen aus PVDF in Western-Blotting-Techniken verwendet, um spezifische Proteine ​​aus den Mischungen von Proteinen zu analysieren. PVDF-Membranen können auch zur Aminosäureanalyse und Proteinsequenzierung verwendet werden. Das wichtigste Merkmal der PVDF-Membran gegenüber einer Nitrozellulosemembran ist, dass sie leicht von den Antikörpern abgestreift und für nachfolgende Antikörpersonden wiederverwendet werden kann.

PVDF-Membranen sind dicker als Nitrozellulosemembranen; daher widerstandsfähiger gegenüber Beschädigungen während der Wiederverwendung. PVDF-Membranen sind stark hydrophob. Daher müssen sie vor Gebrauch in Methanol oder Isopropanol eingeweicht werden.

Was ist der Unterschied zwischen Nitrocellulose und PVDF?

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Nitrocellulose vs PVDF
Nitrocellulose ist ein Polymer aus Cellulose.	PVDF ist ein Fluorpolymer, das durch Polymerisation von Vinylidendifluorid hergestellt wird.
Membranporengröße
Typische Porengrößen sind 0. 1, 0. 2 oder 0. 45μ	Typische Porengrößen sind 0. 1, 0. 2 oder 0. 45μm
Proteinbindungskapazität Nitrocellulose hat eine Proteinbindungskapazität von 80 bis 100 μg / cm
2 . PVDF hat eine Proteinbindungskapazität von 170 bis 200 μg / cm	2 . Empfindlichkeit
Dies hat eine geringe Empfindlichkeit im Vergleich zu PVDF.
Dies hat eine hohe Empfindlichkeit.	Detektion von wenig exprimierten Proteinen
Da die Empfindlichkeit der Nitrocellulosemembranen gering ist, eignet sie sich nicht zum Nachweis von niedrig exprimierten Proteinen.
Dies ist für den Nachweis von wenig exprimierten Proteinen aufgrund seiner hohen Empfindlichkeit besser geeignet.	Hintergrundrauschen
Dies hat ein geringeres Hintergrundrauschen
Dies hat ein höheres Hintergrundrauschen.	Wechselwirkungen mit Proteinen
Proteinmoleküle binden über hydrophobe Wechselwirkungen an Nitrozellulosemembranen.
Proteine ​​binden durch hydrophobe und Dipol-Wechselwirkungen an PVDF-Membranen.	Art der Membran
Nitrocellulose ist spröde und zerbrechlich. Es sind jedoch Versionen von Nitrocellulose verfügbar, und sie sind beständig.
PVDF ist haltbarer und hat eine höhere chemische Beständigkeit.	Fähigkeit, sich zu streifen und wiederzuverwenden
Nitrocellulose kann Schwierigkeiten beim Strippen und erneuten Probieren haben, ohne das Signal zu verlieren.
PVDF ist ideal für Reprobing- und Sequenzierungsanwendungen.	Eignung
Nitrocellulose ist ideal zum Nachweis von niedermolekularen Proteinen.
PVDF eignet sich besser zum Nachweis von Proteinen mit höherem Molekulargewicht.	Andere Anwendungen
Nitrocellulose kann für die Nukleinsäureanalyse und Dot / Slot Blotting verwendet werden.
PVDF kann für Proteinsequenzierung und Festphasentestsysteme verwendet werden.	Kosten
Dies ist billiger als PVDF-Membranen.
Dies ist teurer als Nitrozellulosemembranen.	Notwendigkeit der Vorbenetzung
Nitrozellulosemembranen müssen nicht mit Methanol vorgetränkt werden
PVDF-Membranen müssen mit Methanol vorgetränkt werden.	Zusammenfassung - Nitrocellulose vs PVDF

Nitrozellulosemembranen waren die ersten Membranen, die kommerziell für den Lateral-Flow-Test verwendet wurden. Sie haben eine hohe Kapazität zur Aufnahme von Proteinen. Daher werden Nitrozellulosemembranen beim Western-Blotting verwendet. PVDF ist eine andere Art von Membran, die beim Western Blotting verwendet wird, und es besitzt auch eine hohe Proteinabsorptionskapazität. Beide Typen werden beim Western Blotting zur Proteinanalyse verwendet. PVDF-Membranen weisen jedoch mehr spezielle Eigenschaften auf, was sie für Western-Blotting geeigneter macht als Nitrozellulosemembranen. Nitrozellulosemembranen eignen sich jedoch eher zum Nachweis von niedermolekularen Proteinen, PVDF-Membranen eignen sich besser zum Nachweis von hochmolekulargewichtigen Proteinen. Dies ist der Unterschied zwischen Nitrocellulose und PVDF-Membranen.

Bild mit freundlicher Genehmigung:

1. "Western Blot Transfer" Von Bensaccount in der Wikipedia auf Englisch (CC BY 3. 0) über Commons Wikimedia

Referenz:

1. Luque-Garcia, José L., Ge Zhou, Tung-Tien Sun und Thomas A. Neubert. Verwendung von Nitrozellulosemembranen zur Proteincharakterisierung durch matrixunterstützte Laserdesorptions- / Ionisationsmassenspektrometrie. " Analytische Chemie. U.S. National Library of Medicine, 15. Juli 2006. Web. 28. März 2017

2. "Molekulare Marker und Pflanzenbiotechnologie. " Google Bücher. N. p., n. d. Web. 28. März 2017

3. Montag, 8. April 2013 Tweet. "Die Magie in der Membran: Wählen Sie klug für Best Western Blot Ergebnisse. Biocompare. N. p., 08. April 2013. Web. 28. März 2017