Unterschied zwischen Klonen und Subklonieren

Schlüsseldifferenz - Klonierung vs. Subklonierung

Klonierung, Subklonierung, Subklonierung, Subklonierung, Subklonierung, Subklonierung, Klonen und Subklonieren sind molekularbiologische Verfahren, die genetisch identische Zellen oder Organismen erzeugen, die die interessierende DNA oder das Gen tragen. Klonieren ist eine Technik, die die Insertion des interessierenden Gens oder der DNA in einen Vektor, die Replikation desselben innerhalb eines Wirtsbakteriums und die Produktion von Zellen oder Organismen einschließt, die exakte Kopien des genetischen Aufbaus sind. Das Subklonieren ist eine Technik, die die Insertion des Gens von Interesse, das bereits in einen Vektor eingefügt ist, in einen sekundären Vektor, die Replikation desselben innerhalb eines Wirtsbakteriums und die Produktion von genetisch identischen Kopien von Zellen oder Organismen einschließt. Der Hauptunterschied zwischen Klonieren und Subklonieren besteht darin, dass beim Klonieren das Gen von Interesse, sobald es in einen Vektor ligiert ist, den Klonierungsprozess fortsetzt, während bei der Subklonierung das bereits klonierte Gen von Interesse von dem Elternvektor getrennt wird und wieder in einen Empfängervektor eingefügt und der Prozess fortgesetzt.

INHALT

1. Übersicht und Tastendifferenz
2. Was ist Klonen
3. Was ist Subklonieren
4. Seite an Seite Vergleich - Klonen vs. Subklonieren
5. Zusammenfassung
Was ist Klonen?

Klonen ist das Verfahren, das genetisch identische Organismen oder Zellen produziert. In der Natur geschieht das Klonen in den Mitteln der ungeschlechtlichen Fortpflanzung. Wenn es keine genetische Rekombination oder Veränderung gibt, erhalten Tochterzellen dieselbe genetische Zusammensetzung des Elternteils. Prokaryotische und eukaryotische Organismen erzeugen Klone durch binäre Spaltung, Knospung, Mitose usw. In der Molekularbiologie sind Klonierungsgene oder spezifische DNA-Fragmente eine beliebte Methode, um die Struktur und Funktion dieses speziellen DNA-Abschnitts zu untersuchen.

Das Hauptziel des molekularen Klonens besteht darin, Millionen Kopien von genetisch identischen Zellen oder Organismen herzustellen, die das interessierende DNA-Fragment (hauptsächlich Gene) tragen. Es schafft Organismen mit exakten genetischen Kopien eines anderen. Vor allem werden spezifische Gene in molekularen Studien geklont, um strukturelle und funktionelle Informationen und für die DNA-Sequenzierung zu erhalten. Auch für die Produktion von spezifischen Proteinen oder Produkten in großem Maßstab wird das Klonen weit verbreitet.

Klonierungsverfahren

Die grundlegenden Schritte der Klonierungsprozedur sind wie folgt.

Identifizierung und Isolierung des Gens von Interesse. (Amplifikation des Gens von Interesse durch PCR).

  1. Restriktionsverdau des Gens von Interesse (Restriktionsendonuklease schneidet das Gen).
  2. Restriktionsverdau der Vektor-DNA.(Die Vektor-DNA wird auch unter Verwendung der gleichen Restriktionsendonuclease geschnitten).
  3. Insertion des Gens in den Vektor und Bildung des rekombinanten Moleküls.
  4. Transformation des rekombinanten Vektors in ein Wirtsbakterium.
  5. Isolierung und Identifizierung der transformierten Bakterien (der Plasmidvektor sollte ein selektierbares Gen enthalten, am häufigsten ein Antibiotikaresistenzgen, um transformierte Bakterien zu screenen).
  6. Rekombinante Genexpression im Wirt.
  7. Figure_01: Klonierungsverfahren

Was ist Subcloning?

Subklonieren ist eine Prozedur, bei der ein Gen von Interesse von einem Vektor zu einem anderen Vektor bewegt wird, um die Expression des Gens zu sehen, um die gewünschte Funktionalität des Gens zu erhalten. Bei dieser Methode sind zwei Vektoren beteiligt; nämlich Elternvektor und Zielvektor. Klonierte Inserts werden beim Subklonieren wieder in einen zweiten Vektor bewegt. Das Ziel der Übertragung des Gens vom ersten Vektor auf den zweiten Vektor besteht darin, etwas zu erhalten, was vom ersten Vektor nicht möglich ist, oder ein Gen innerhalb des bereits klonierten DNA-Fragments wieder zu trennen und alleine zu exprimieren. Zu Beginn werden bei diesem Verfahren Restriktionsenzyme verwendet.

Subklonierungsverfahren

Die grundlegenden Schritte des Subklonens sind wie folgt.

Mit Hilfe von Restriktionsendonucleasen die Trennung der interessierenden DNA im Donorplasmid (Stammvektor).

  1. Amplifikation der interessierenden DNA unter Verwendung von PCR.
  2. Reinigung des PCR-Produkts (DNA von Interesse) durch Gelelektrophorese.
  3. Öffnung des Empfängerplasmids durch gleiche Restriktionsendonucleasen, die zur Trennung der interessierenden DNA im Stammplasmid verwendet wurden.
  4. Ligation der DNA von Interesse (Gen) in das Empfängerplasmid, um das subklonierte Plasmid zu erzeugen.
  5. Transformation des subklonierten Vektors in ein kompetitives Wirtsbakterium.
  6. Screening von transformierten Zellen.
  7. Reinigung der Plasmid-DNA und Verwendung für die DNA-Sequenzierung oder Expression der Gene, um die gewünschten Produkte zu erhalten.
  8. Das Subklonieren wird bei Gelegenheiten durchgeführt, bei denen ein Gen von der klonierten Gruppe von Genen isoliert wird oder wenn das Gen von Interesse erforderlich ist, um in ein nützliches Plasmid zu übertragen, um die genaue Funktion des Gens von Interesse zu sehen.

Figure_02: Subcloning-Verfahren

Was ist der Unterschied zwischen Klonen und Subklonen?

Klonen vs. Subklonieren

Klonen ist das Verfahren, das genetisch identische Organismen oder Zellen produziert.

Subklonieren ist eine Prozedur, bei der ein Gen von Interesse von einem Vektor zu einem anderen Vektor bewegt wird, um die Expression des Gens zu sehen, um die gewünschte Funktionalität des Gens zu erhalten. Prozess
Die DNA von Interesse vom Organismus trennen und einmal in einen Vektor einführen und klonieren.
Bereits klonierte DNA wird vom ersten Vektor getrennt und in einen zweiten Vektor eingefügt und kloniert. Bewegung über Vektoren einfügen
Bewegt keine Einfügungen (DNA von Interesse) von einem Vektor in einen anderen Vektor.
Verschiebt Einfügungen vom übergeordneten Vektor in den Zielvektor. Zusammenfassung - Klonen vs. Subklonieren

Das Klonen erzeugt genetisch identische Zellen oder Organismen mit dem eingefügten Gen oder der DNA von Interesse.Es verläuft durch die Trennung und Insertion der interessierenden DNA in einen Vektor und eine Expression innerhalb eines Wirtsbakteriums. Subcloning teilt ähnliche Schritte mit dem Klonen. Beim Subklonieren wird jedoch bereits kloniertes DNA-Fragment (Gen von Interesse) in einen Vektor inseriert und in ein Wirtsbakterium transformiert. Das ist der Hauptunterschied zwischen Klonen und Subklonen.

Referenzen

Lodish, Harvey. DNA-Klonierung mit Plasmidvektoren. "Molekulare Zellbiologie. 4. Auflage. U.S. National Library of Medicine, 01. Januar 1970. Web. 05. März 2017

  1. "Subcloning. "Wikipedia. Wikimedia Foundation, 14. Februar 2017. Web. 06. März 2017
  2. "Subcloning. Subcloning | Open Access-Artikel | Open Access Zeitschriften | Tagungsband | Herausgeber | Autoren | Gutachter | wissenschaftliche Veranstaltungen. N. p. , n. d. Web. 06. März 2017
  3. Wackerhage, Henning. "Wie zu subclone. "Wie zu subclone. N. p. , 01. Januar 1970. Web. 06. März 2017
  4. Mit freundlicher Genehmigung

Molecular Cloning Procedure - Von CNX OpenStax [CC BY 4. 0], über Wikimedia Commons

  1. Subklonierungsverfahren - von Ursprünglicher Uploader war Takometer in der Wikipedia auf Englisch (Übertragen aus en. Wikipedia zu Commons.) [CC BY 2. 5], über Wikimedia Commons