Unterschied Zwischen Southern, Northern und Western Blotting | Southern vs Northern gegen Western Blotting

Schlüsselunterschied - Northern vs Southern gegen Western Blotting

Der Nachweis spezifischer DNA-, RNA- Arten von Studien in der Molekularbiologie. Die Gelelektrophorese ist eine Technik, die DNA, RNA und Proteine entsprechend ihrer Größe trennt. Aus den Gelprofilen werden spezielle DNA-Sequenzen, RNA-Sequenzen oder Proteine durch spezielle Techniken, die Blotting und Hybridisierung mit markierten Sonden genannt werden, nachgewiesen. Es gibt drei verschiedene Arten von Blotting-Methoden, nämlich Süd, Nord und West. Der Hauptunterschied zwischen Northern Southern und Western Blotting liegt in der Art des Moleküls, das es aus einer Probe erkennt. Southern Blotting ist eine Methode, die eine spezifische DNA-Sequenz aus einer DNA-Probe detektiert. Northern Blotting ist eine Technik, die eine spezifische RNA-Sequenz aus einer RNA-Probe detektiert. Western Blotting ist eine Methode, die ein bestimmtes Protein aus einer Proteinprobe detektiert.

INHALT

1. Übersicht und Tastendifferenz

2. Was ist Southern Blotting

3. Was ist Northern Blotting

4. Was ist Western Blotting

5. Seite an Seite Vergleich - Northern vs Southern gegen Western Blotting

6. Zusammenfassung

Was ist Southern Blotting?

Southern Blotting-Technik wurde 1975 von E. M. Southern zur Identifizierung einer spezifischen DNA-Sequenz aus einer DNA-Probe entwickelt. Dies ist die erste Blotting-Technik, die in der Molekularbiologie eingeführt wurde. Es ermöglichte den Nachweis von spezifischen Genen aus der DNA, spezifischen Fragmenten aus DNA usw. Es gibt mehrere Schritte, die an der Southern-Blotting-Technik beteiligt sind. Sie sind wie folgt.

DNA wird aus der Probe isoliert und mit Restriktionsendonukleasen verdaut.
Die verdaute Probe wird durch Agarose-Gelelektrophorese getrennt.
DNA-Fragmente im Gel werden unter Verwendung einer alkalischen Lösung in Einzelstränge denaturiert.
Einzelstrang-DNA wird durch Kapillartransfer auf eine Nitrozellulose-Filtermembran übertragen.
Übertragene DNA wird permanent auf der Membran fixiert.
Fixierte DNA auf der Membran wird mit markierten Sonden hybridisiert.
Ungebundene DNA wird durch Waschen von der Membran abgewaschen.
Röntgenfilm wird der Membran ausgesetzt und ein Autoradiogramm wird hergestellt.

Southern Blotting wird für verschiedene Aspekte der Molekularbiologie angewendet.Es ist nützlich bei RFLP-Kartierungen, forensischen Studien, DNA-Methylierung in der Genexpression, Nachweis von mutierten Genen bei genetischen Störungen, DNA-Fingerprinting usw.

Abbildung 01: Southern Blotting Technique

Was ist Northern Blotting?

Northern Blotting ist eine Methode zum Nachweis einer spezifischen RNA-Sequenz oder mRNA-Sequenz aus einer Probe zur Untersuchung der Genexpression. Diese Technik wurde 1979 von Alwine, Kemp und Stark entwickelt. Sie unterscheidet sich von den Sauerteig- und Western-Blotting-Techniken durch mehrere Schritte. Diese Technik wird jedoch auch durch Gelelektrophorese, Blotting und Hybridisierung mit spezifischen markierten Sonden und Detektion durchgeführt. Die Northern-Blotting-Technik wird wie folgt durchgeführt.

RNA wird aus der Probe extrahiert und durch Gelelektrophorese getrennt.
RNA wird vom Gel auf eine Blotting-Membran übertragen und fixiert.
Die Membran wird mit einer markierten Sonde behandelt, die aus cDNA oder RNA hergestellt wurde (die Sonde ist komplementär zu einer spezifischen Sequenz in der Probe).
Die Sonde wird mit der Membran inkubiert, um mit einer spezifischen Sequenz zu binden.
Ungebundene Sonden werden abgewaschen.
Hybridisierte Fragmente werden von einem Autoradiographen detektiert.

Northern Blotting ist ein wichtiges Instrument zur Detektion und Quantifizierung von hybridisierter mRNA, zum Studium des RNA-Abbaus, zur Bewertung der RNA-Halbwertszeit, zum Nachweis von RNA-Spleißen, zum Studium der Genexpression usw. < Was ist Western Blotting?

Western Blotting ist eine Methode zum Nachweis eines spezifischen Proteins aus einem Proteingemisch unter Verwendung eines markierten Antikörpers. Daher ist Western Blot auch als

Immunoblot

bekannt. Diese Technik wurde 1979 von Towbin und eingeführt und wird nun routinemäßig in den Laboren zur Proteinanalyse durchgeführt. Die Schritte sind wie folgt. Proteine werden aus der Probe extrahiert. Proteine werden durch Polyacrylamid-Gelelektrophorese getrennt.

Getrennte Moleküle werden durch Elektroporation in eine PVDF-Membran oder Nitrocellulosemembran überführt.
Die Membran wird für die unspezifische Bindung mit dem Antikörper
Übertragene Proteine sind an primären Antikörper gebunden (enzymmarkierte Antikörper).
Die Membran wird gewaschen, um nichtspezifisch gebundene Primärantikörper zu entfernen.
Gebundene Antikörper werden durch Zugabe eines Substrats und Nachweis des gebildeten gefärbten Präzipitats nachgewiesen.
Western Blotting ist nützlich beim Nachweis von Anti-HIV-Antikörpern in einer menschlichen Serumprobe. Western Blot kann auch als Bestätigungstest für Hepatitis B-Infektion und endgültigen Test für Rinderwahnsinn verwendet werden.
Abbildung 03: Western Blotting

Was ist der Unterschied zwischen Northern Southern und Western Blotting?

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Northern vs Southern gegen Western Blotting

Detektiertyp

Northern Blotting
Northern Blotting erkennt eine spezifische RNA-Sequenz aus einer RNA-Probe.
Southern Blotting	Southern Blotting erkennt eine spezifische DNA-Sequenz aus einer DNA-Probe.
Western Blotting	Western Blot detektiert ein spezifisches Protein aus einer Proteinprobe.
Art des Gels	Northern Blotting
Dieses verwendet Agarose / Formaldehyd-Gel.
Southern Blotting	Dieses verwendet ein Agarose-Gel.
Western Blotting	Dieses verwendet Polyacrylamidgel.
Blotting-Methode	Northern Blotting
Dies ist eine Kapillardurchführung.
Southern Blotting	Dies ist eine Kapillartransfer.
Western Blotting	Dies ist eine elektrische Übertragung.
Verwendete Sonden	Northern Blotting
cDNA- oder RNA-Sonden, die radioaktiv oder nicht radioaktiv markiert wurden.
Southern Blotting	DNA-Sonden werden radioaktiv oder nicht-radioaktiv markiert.
Western Blotting	Primäre Antikörper werden als Sonden verwendet.
Erkennungssystem	Northern Blotting
Dies wird mit Hilfe eines Autoradiographen oder einer Licht- oder Farbänderung durchgeführt.
Southern Blotting	Dies wird mit Hilfe eines Autoradiographen, Lichterkennung oder Farbänderung durchgeführt.
Western Blotting	Dies wird mit der Erkennung von Licht oder Farbänderung durchgeführt.
Zusammenfassung - Northern vs Southern gegen Western Blotting	Das Blotting ist eine spezielle Technik, die zur Identifizierung spezifischer DNA, RNA oder Proteine aus den Proben entwickelt wurde. Es gibt drei getrennte Blotting-Verfahren, nämlich Nord, Süd und West, um eine bestimmte Art von Molekül nachzuweisen. Die Northern-Blotting-Technik dient zum Nachweis einer spezifischen RNA-Sequenz aus einer Mischung von RNA. Die Southern-Blotting-Technik ermöglicht den Nachweis einer spezifischen DNA-Sequenz aus einer DNA-Probe, und eine Western-Blotting-Technik wird entwickelt, um ein spezifisches Protein aus einer Proteinmischung zu identifizieren.

Referenzen

1. Gibbons, Janay. "Western Blot: Protein Transfer Übersicht. "Nordamerikanisches Journal der medizinischen Wissenschaften. Medknow Publications & Media Pvt Ltd, März 2014. Web. 27. März 2017

2. Brown, T. "Southern Blotting. "Aktuelle Protokolle in der Immunologie. U.S. National Library of Medicine, Mai 2001. Web. 27. März 2017

3. Er, Shan L. "Northern Blot. "Methoden in der Enzymologie. U.S. National Library of Medicine, 2013. Web. 27. März 2017

Bild mit freundlicher Genehmigung:

1. "Northern Blot Scheme" Von RNA405 - Eigene Arbeit (Public Domain) via Commons Wikimedia

2. "Western Blot 114A" von Amanthabagdon - Eigene Arbeit (Public Domain) via Commons Wikimedia