Unterschied Zwischen Nick-Übersetzung und Primer-Erweiterung | Nick Translation vs Primer Extension

Schlüsselunterschied - Nick Translation vs Primer Extension

Nick Translation und Primer Extension sind zwei wichtige Techniken der Molekularbiologie. Der Hauptunterschied zwischen der Nick-Translation und der Primer-Extension besteht darin, dass der Nick-Translationsprozess markierte Sonden für andere Hybridisierungstechniken erzeugt, während die Primer Extension Methode eine spezifische RNA-Sequenz aus einem Gemisch identifiziert und Informationen über die Expression von mRNA. Beide Techniken haben eine große Bedeutung und werden routinemäßig in molekularen Forschungslaboren durchgeführt.

INHALT

1. Übersicht und Tastendifferenz

2. Was ist Nick Übersetzung

3. Was ist Primer Extension

4. Seite an Seite Vergleich - Nick Übersetzung vs Primer Extension

5. Zusammenfassung

Was ist Nick Translation?

Nick-Translation ist ein wichtiges Verfahren zur Herstellung markierter Sonden für verschiedene molekularbiologische Techniken wie Blotting,

in situ Hybridisierung, fluoreszierende in situ > in vitro Methode der DNA-Markierung. DNA-Sonden werden verwendet, um spezifische DNA- oder RNA-Sequenzen zu identifizieren. Mit Hilfe einer markierten Sonde können spezifische Fragmente aus einem komplexen Gemisch von Nukleinsäuren markiert oder visualisiert werden. Daher werden markierte Sonden unter Verwendung verschiedener Techniken hergestellt, die für verschiedene Techniken verwendet werden. Nick-Translation ist eine solche Methode, die markierte Sonden mit Hilfe von DNase 1 und DNA-Polymerase 1-Enzymen produziert.

Der Nick-Translationsprozess beginnt mit der Enzymaktivität von DNase 1. DNase 1 führt Nicks in das Phosphat-Rückgrat der doppelsträngigen DNA ein, indem Phosphodiester-Bindungen zwischen Nucleotiden gespalten werden. Sobald der Nick erzeugt ist, wird freie 3'-OH-Gruppe des Nukleotids erhalten, und das Enzym DNA-Polymerase 1 wird darauf wirken. Die 5'- bis 3'-Exonukleaseaktivität der DNA-Polymerase 1 entfernt Nucleotide aus dem Nicken in die 3'-Richtung des DNA-Strangs. Gleichzeitig arbeitet die Polymeraseaktivität des Enzyms DNA-Polymerase 1 und fügt Nukleotide hinzu, um die entfernten Nukleotide zu ersetzen. Wenn die Nukleotide markiert sind, wird der Ersatz durch die markierten Nukleotide stattfinden und die DNA wird zur Identifizierung markiert. Diese neu synthetisierte markierte DNA kann als Sonde in verschiedenen Hybridisierungsreaktionen in der Molekularbiologie verwendet werden.

Abbildung 01: Nick-Übersetzungsprozess

Was ist Primer Extension?

Die Primer-Extension ist eine Technik, die verwendet wird, um eine spezifische RNA-Sequenz aus einer RNA-Mischung zu finden und das 5'-Ende des mRNA-Transkripts zu lokalisieren. Es wird auch verwendet, um die Struktur von RNA und Expression zu studieren. Das Primer-Extensionsverfahren wird mit markierten Primern oder mit markierten Nukleotiden durchgeführt. Wenn markierte Primer verwendet werden, schließt es die Notwendigkeit aus, die Nukleotide zu markieren, die für die Synthese von cDNA verwendet werden. Es gibt mehrere Schritte in dieser Technik. Es beginnt mit der Extraktion von RNA aus der Probe. Dann wird ein markierter Oligonukleotid-Primer zusammen mit den notwendigen Bestandteilen zu der Mischung gegeben, um die cDNA einer spezifischen RNA-Sequenz zu synthetisieren. Primer annealt sich mit der komplementären Sequenz aus der Mischung. Unter Verwendung der Primer-Annealed-Sequenz als Matrize synthetisiert die Enzym-Reverse-Transkriptase die komplementäre DNA (cDNA) der RNA-Sequenz. Primer-Annealing und reverse Transkription treten nur dann auf, wenn die spezifische RNA-Sequenz in der Probe vorhanden ist. Wenn die denaturierende Gelelektrophorese durchgeführt wird, kann schließlich die Größe der RNA-Sequenz bestimmt werden. Es ist auch leicht, die +1-Base der mRNA (Transkriptionsinitiationsstelle) -Sequenz durch die Primer-Extensionsmethode zu finden. Die Menge an mRNA, die in der Probe vorhanden ist, kann durch diese Methode quantifiziert werden, wenn überschüssiger Primer verwendet wird.

Abbildung 02: Primer-Erweiterung

Was ist der Unterschied zwischen Nick Translation und Primer Extension?

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Nick Translation vs Primer Extension

Die Nick-Translation ist ein Prozess, der markierte DNA-Sonden für verschiedene Hybridisierungsreaktionen erzeugt.

Die Primer-Extension ist eine Technik, um spezifische RNA zu finden oder die Genexpression zu untersuchen.
Verwendete Enzyme	DNase 1 und DNA-Polymerase-Enzyme werden verwendet.
Reverse-Transkriptase-Enzym wird verwendet.
Bedeutung	Nick-Translation erleichtert das Markieren der spezifischen DNA-Sequenz.
Die Primer-Extension ermöglicht den Nachweis der spezifischen mRNA-Sequenzgröße und der Menge, die in der Probe vorhanden ist.
Zusammenfassung - Nick-Übersetzung vs Primer-Erweiterung	Die Nick-Translation ist eine Methode zur Synthese markierter Sonden basierend auf den Aktivitäten von DNase 1 und

E. coli

DNA Polymerase 1 Enzymen. Es handelt sich um ein in vitro Verfahren, das in den Labors vor verschiedenen Hybridisierungstechniken eingesetzt wurde. Während der Nick-Translation entfernt die 5'-3'-Exonukleaseaktivität der DNA-Polymerase 1 Nucleotide vor dem Nicken, und die Polymeraseaktivität der DNA-Polymerase 1 ersetzt die entfernten Nucleotide durch markierte Nucleotide hinter dem Nucleus. Die Primer-Extension ist eine Methode, die verwendet wird, um ein spezifisches RNA-Transkript aus einem Gemisch zu detektieren und die Größe und die Menge der interessierenden RNA zu quantifizieren. Dies ist der Unterschied zwischen der Nick-Übersetzung und der Primer-Erweiterung. Referenzen 1. Reid, Alex. "Nick Übersetzung. "Springer. N. p., n. d. Web. 18. Apr. 2017

2. "Primer-Erweiterung. "National Diagnostics. N. p., n. d. Web. 19. Apr. 2017

3. Kuo, M. T. und W. Plunkett.Nick-Translation von Metaphase-Chromosomen: In vitro-Markierung von Nuklease-überempfindlichen Regionen auf Chromosomen. "Proceedings der Nationalen Akademie der Wissenschaften der Vereinigten Staaten von Amerika. U.S. National Library of Medicine, Februar 1985. Web. 19. April 2017

Bild mit freundlicher Genehmigung:

1. "Primer Extension Assay" Von Jjnmmnjj - Eigene Arbeit (CC BY-SA 3. 0) über Commons Wikimedia