Unterschied zwischen wählbarem Marker und Reportergen

Schlüsselunterschiede - Selektierbarer Marker gegen Reportergen

Gentechnische Technik wird verwendet, um wichtige Gene vom Organismus auf einen anderen Organismus zu übertragen. Die Insertion eines fremden Gens in das Genom eines anderen Organismus und dessen Expression innerhalb der Wirtszelle sind die schwierigsten Schritte beim Gentransfer. Um den Erfolg des Transformationsprozesses nachzuweisen, werden ein selektierbarer Marker und ein Reportergen im rekombinanten Molekül verwendet. Ein selektierbarer Marker ist eine DNA-Sequenz oder ein Gen, das die transformierten Zellen aus den nicht-transformierten Zellen exprimiert und selektiert. Ein Reportergen ist ein weiteres Gen, das verwendet wird, um transformierte Zellen zu unterscheiden und zu quantifizieren oder zu detektieren, wie das eingefügte Gen innerhalb des Wirtes funktioniert. Der entscheidende Unterschied zwischen dem selektierbaren Marker und dem Reportergen besteht darin, dass der selektierbare Marker verwendet wird, um die nicht-transformierten Zellen auszusondern und die transformierten Zellen zu signalisieren, während das Reportergen verwendet wird, um das Niveau der Genexpression im Wirt zu quantifizieren.

INHALT
1. Übersicht und Tastendifferenz
2. Was ist wählbarer Marker
3. Was ist ein Reportergen
4. Seite an Seite Vergleich - Markierbarer Marker gegen Reportergen
5. Zusammenfassung

Was ist ein auswählbarer Marker?

In der Gentechnik wird das interessierende Gen in einen geeigneten Vektor eingefügt und in Wirtsorganismen transformiert. Die Transformation ist jedoch nur in den kompetenten Wirtszellen erfolgreich und es besteht die Möglichkeit, dass Wirtszellen die Aufnahme von fremder DNA zurückweisen. Daher ist die Differenzierung der transformierten und nicht-transformierten Zellen wichtig, um mit weiteren Experimenten fortzufahren. Daher integrieren die Forscher ein selektierbares Markergen in einen Vektor zur einfachen Selektion der transformierten Zellen aus nicht-transformierten Zellen. Ein selektierbarer Marker ist eine DNA-Sequenz, insbesondere ein Gen, das zur Identifizierung der transformierten Zellen nützlich ist. Dieses Markergen zeigt ein Merkmal, das zu einer künstlichen Selektion von transformierten Zellen aus nicht-transformierten Zellen auf einem Medium paßt.

Die häufigsten selektierbaren Marker in der Molekularbiologie sind Antibiotika-resistente Gene. Ein Antibiotikaresistenzgen wird in den Vektor inseriert und in Wirtszellen, insbesondere in das Wirtsbakterium, transformiert. Dieses bestimmte Antibiotikum wird in das Wachstumsmedium des Bakteriums eingebaut. Aufgrund der Anwesenheit des selektiven Markers können unter den selektiven Bedingungen nur Zellen, die den geeigneten selektierbaren Marker enthalten, überleben.Nicht-transformierte Zellen können im antibiotikumhaltigen Medium nicht wachsen. Aufgrund des selektierbaren Markers, der antibiotikaresistent ist, werden daher transformierte Zellen leicht identifiziert.

Gene, die Eigenschaften für Antimetaboliten und Herbizide verleihen, werden als selektive Marker in Klonierungsvektoren in der Pflanzengenetik verwendet. Diese Cotransformation von selektiven Markern in genetisch modifizierte Organismen hat jedoch negative Auswirkungen auf die Umwelt und den Menschen. Die Freisetzung von antibiotikaresistenten Bakterien kann den Antibiotikaresistivitätsgrad menschlicher Pathogene erhöhen. Es kann das Produkt oder die Biomasse durch Antibiotika kontaminieren und kann den selektiven Druck durch den Abbau und die Inaktivierung von Antibiotika verlieren.

Abbildung 01: Plasmidvektor für Gentransfer mit selektierbarem Marker

Was ist ein Reportergen?

Reportergene sind Gene, die den Nachweis oder die Messung der eingefügten Genexpression ermöglichen. Diese Reportergene können an regulatorische Sequenzen des Gens von Interesse angehängt werden, um den Expressionsort oder die Expressionssignale zu signalisieren. Daher werden sie während der Expression von Genen unter demselben Promotor in eine einzelne mRNA-Sequenz transkribiert und dann in ein Protein translatiert, welches das Niveau der Genexpression anzeigen kann.

Reportergene sind von verschiedener Art und enthalten visuell identifizierbare Eigenschaften, die normalerweise an fluoreszierenden und lumineszierenden Proteinen beteiligt sind. Gene, die fluoreszierendes Protein und Enzyme codieren, wandeln unsichtbare Substrate in lumineszente oder gefärbte Produkte um, indem sie die erfolgreiche Genexpression signalisieren und die Möglichkeit zur Quantifizierung der Genexpression geben.

Abbildung 02: Reporter Gene Expression

Was ist der Unterschied zwischen Selectable Marker und Reporter Gene?

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Selektierbarer Marker gegen Reportergen

Selektierbarer Marker ist eine Art DNA-Sequenz, die dazu dient, transformierte Zellen mit nicht transformierten Zellen zu unterscheiden. Reportergen ist ein Gen, das dazu beiträgt, die Expression des gewünschten Gens zu quantifizieren, das in die Wirtszelle eingefügt wird.
Art der hergestellten Einheiten
Gene sind mit Merkmalen kodiert, die bei der künstlichen Selektion auf wachsenden Medien helfen. Gene werden mit visuell identifizierbaren Eigenschaften codiert.
Verwendung
Antibiotikaresistenzgene, Antimetabolitengene, Herbizidresistenzgene usw. sind Beispiele für selektierbare Marker. Gen-Code für grün fluoreszierendes Protein, β-Glucuronidase, Chloramphenicolacetyltransferase, rotes fluoreszierendes Protein usw. sind Beispiele.

Zusammenfassung - Selektierbarer Marker gegen Reportergen

Selektierbare Marker erlauben transformierte Zellen in Selektionsmedien mit einem bestimmten Antibiotikum oder Herbizid zu wachsen. Sie werden für die frühe Selektion transformierter Zellen verwendet. Reporter-Gene werden verwendet, um das Ausmaß der Expression des eingefügten gewünschten Gens zu quantifizieren. Sie ermöglichen auch die Differenzierung von transformierten und nicht-transformierten Zellen. Dies ist der Unterschied zwischen einem selektierbaren Marker und einem Reportergen.Sowohl Selektionsmarker als auch Reportergen werden in der Gentechnik als wichtige Marker angesehen.

Referenzen:
1. Ziemienowicz, Alicja. "Selektierbare Marker und Reportergene pflanzen. "SpringerLink. Springer-Verlag, n. d. Web. 23. März 2017.
2. Shih, Chen-Han, Hsiao-Yin Chen, Hung-Chieh Lee und Huai-Jen Tsai. Das Lila-Chromoprotein-Gen dient als neuer Selektionsmarker für die Transgenese der Microalga Nannochloropsis oculata. " PLUS EINS. Öffentliche Bibliothek der Wissenschaft, n. d. Web. 25. März 2017

Bild mit freundlicher Genehmigung:
1. "Plasmid mit Insert" Von Michael Jeltsch - Eigene Arbeit (CC BY-SA 4. 0) über Commons Wikimedia
2. "Reportergen" Von TransControl bei en. wikipedia (CC BY-SA 3. 0) über Commons Wikimedia